Zprávy CEM (SZÚ, Praha) 2001; 11(2):91-93.

 

EHK-280 Bakteriologická diagnostika-vyhodnocení

 

Helena Žemličková, Pavla Urbášková

 

celkové hodnocení identifikací

 

            Celkem byly rozeslány vzorky 110 laboratořím. 109 laboratoří odeslalo výsledek do závěrečného termínu. Za 4 vzorky mohly laboratoře získat maximálně 8 bodů. Bodování bylo provedeno ve stupnici 2, 1, 0 a -1 bod.

 

Graf 1: Celkový výsledek laboratoří v identifikacích ehk-280

 

 

            Maximálního počtu bodů dosáhlo 106, tj. 97,2% laboratoří. Limit pro úspěšné absolvování byl 7,384 bodů, (aritmetický průměr minus dvě směrodatné odchylky,

tj. 7,954 – (2x0,285) = 7,384). Tohoto limitu dosáhlo 106 laboratoří, 3 laboratoře tento limit nesplnily.

 

 

Výsledky u jednotlivých vzorků

Vzorek 1: Izolát z hemokultury od pacienta z JIP.

 

Odpověď: Pseudomonas aeruginosa

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Pseudomonas aeruginosa

 

  109

2

  100%

Celkem

 

  109

 

  100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 20 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

 

Vzorek 2: Výtěr z krku od 16letého pacienta s pharyngitidou.

 

Odpověď: Arcanobacterium haemolyticum

Vzorek dále obsahoval: Neisseria lactamica, viridující streptokok

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Arcanobacterium haemolyticum

 

   106

2

  97,2%

Arcanobacterium species

 

      1

   1

    0,9%

Patogen nenalezen

 

      2

   0

    1,8%

Celkem

 

  109

 

  100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 19 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

 

VZOREK 3: Stolice od 7letého dítěte s podezřením na apendicitidu.

 

Odpověď: Yersinia enterocolitica

Vzorek dále obsahoval: Escherichia coli, Enterococcus faecalis

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Yersinia enterocolitica

 

   109

   2

  100%

Celkem

 

   109

 

  100%       

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 20 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

 

Vzorek 4: Izolát z moče od pacienta s urosepsí.

 

Odpověď: Proteus mirabilis

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Proteus mirabilis

 

109

   2

  100%

Celkem

 

109

 

  100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 20 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

Všechny zúčastněné laboratoře izolovaly a správně určily vzorky 1, 3, a 4. Díky typické fenotypické charakteristice nejsou ve většině případů Pseudomonas aeruginosa a Proteus mirabilis zdrojem obtíží při identifikaci. Vzorek č. 3 – Yersinia enterocolitica patří k relativně méně frekventovaným patogenům, izolovaným od pacientů s gastrointestinálními obtížemi. I přesto se všem laboratořím zdařila izolace i identifikace. Y. enterocolitica byla zasílána v EHK-199, kde byla správně určena 99% laboratořemi. Příznaky yersiniové infekce mohou probíhat pod obrazem akutní appendicitidy tak, jak bylo uvedeno v legendě k tomuto vzorku.

           

Vzorek č. 2 obsahoval Arcanobacterium haemolyticum. Tento mikrob byl zaslán v EHK-215 jako edukativní vzorek. Plný počet bodů získalo 106 laboratoří, jedna laboratoř určila správně rod, dvě laboratoře mikroba neizolovaly nebo neidentifikovaly. Rod Arcanobacterium obsahuje 4 species, z nichž tři, A. haemolyticum, A. pyogenes a A. bernardiae, jsou klinicky významné. Tyto druhy jsou kataláza negativní a mají fermentativní metabolismus glukózy. Pro mezidruhovou identifikaci A. haemolyticum je rozhodující pozitivní inverzní CAMP test se Staphylococcus aureus. Tento mikrob je rovněž spolehlivě identifikován API Coryne. Numerický profil v testu API Coryne kmene A. haemolyticum z této série EHK byl 2530360, A. haemolyticum 99,9%ID.

 

Požadavek byl označit signifikantního patogena a vyšetřit jeho citlivost ke gentamicinu a ciprofloxacinu.  Kmen č. 4  Proteus  mirabilis byl do NRL/ATB zaslán jednou laboratoří v průběhu surveillance rezistence komunitních močových patogenů v dubnu 2000. Kmen byl rezistentní k  ciprofloxacinu a citlivý ke gentamicinu.  Všech 109 laboratoří, které se zúčastnily této série EHK, správně identifikovalo P. mirabilis. Nesprávně označily tento kmen jako rezistentní ke gentamicinu dvě laboratoře (1,8%) a jako citlivý k ciprofloxacinu 12 laboratoří (11.0%). Celkové výsledky vyšetření citlivosti jsou v tabulce 1, která obsahuje také limitní hodnoty průměrů inhibičních zón (IZ) a minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny gramnegativních střevních tyček, výsledky naměřené v NRL pro antibiotika a výsledky laboratoří v kategorii citlivosti a rezistence u kmene č. 4. 

 

Tabulka 1. Výsledky vyšetření citlivosti  kmene č. 4 Proteus mirabilis

 

Průměry IZ (mm)

MIC (mg/l)

Správné výsledky

Antibiotikum

limit pro citlivé [1]

rozmezí naměřené v NRL*

limit pro citlivé [1]

hodnoty naměřené  v NRL**

kategorie

[1]

počet laboratoří

%

 

ciprofloxacin

>=21

19-20

<=1

2-4

R

97/109

89.0

 

gentamicin

>=15

22-23

<=4

0.25

C

107/109

98.2

 

* 5 měření diskovou difuzní metodou [1]; obsah disků: gentamicin 10 ug, ciprofloxacin 5 ug.

** 2 měření diluční mikrometodou [1].

C - citlivý, R - rezistentní.

 

Kmen č. 5 Haemophilus influenzae

Kmen č. 5 je H. influenzae CNCTC 5063 (kopie kmene ATCC 49247) pro kontrolu kvality vyšetření citlivosti [1,2]. Požadavek byl na vyšetření citlivosti k ampicilinu, tetracyklinu a ko-trimoxazolu. Kmen neprodukuje beta-laktamázu, je však rezistentní k ampicilinu, tetracyklinu a citlivý ke ko-trimoxazolu. Citlivost vyšetřilo 108 ze 109 laboratoří (99.1%) Celkové výsledky vyšetření citlivosti jsou v tabulce 2, která obsahuje také limitní hodnoty průměrů inhibičních zón (IZ) a minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny H. influenzae, výsledky naměřené v NRL pro antibiotika a výsledky laboratoří v kategorii citlivosti a rezistence u kmene č. 5.

 

Tabulka 2. Výsledky vyšetření citlivosti  kmene č. 5  H. influenzae.

 

Průměry IZ (mm)

MIC (mg/l)

Správné výsledky

Antibiotikum

limit pro citlivé kmeny H.i. [1]

rozmezí naměřené v NRL*

limit pro citlivé kmeny H. i. [1]

hodnoty naměřené  v NRL**

kategorie

[1]

počet laboratoří

%

 

ampicilin

>=22

18-21

<=1

4

R

98/108

9.3

tetracyklin

>=29

18-20

<=2

>16

R

105/108

97.2

ko-trimoxazol

>=16

26-30

<=8

<=0.5

C

 106/108

98.1

 

* 5 měření diskovou difuzní metodou [1]; obsah disků: ampicilin 10 ug, tetracyklin 30 ug, ko-trimoxazol 25 ug.

** 1 měření agarovou diluční metodou [1].

C - citlivý, R - rezistentní.

 

Závěr

MIC  a průměr inhibiční zóny ciprofloxacinu u kmene č. 4 P. mirabilis ukazují na rezistenci nižšího stupně k fluorovaným chinolonům (tabulka 1).  Kmen vytvářel kolem ciprofloxacinu inhibiční zóny jen o 1-2 mm menší než je hraniční průměr pro citlivé kmeny, a to bylo zřejmě příčinou proč 12 laboratoří (11%) nerozpoznalo jeho rezistenci. Určité podezření na rezistenci kmene gramnegativní tyčky k fluorovaným chinolonům může být jeho rezistence ke starým chinolonům (MIC kyseliny nalidixové u kmene č. 4 byla MIC>64 mg/l), to však neplatí bezvýhradně. Identifikaci podobných kmenů usnadňuje podrobná znalost distribuce průměrů IZ (nebo MIC) obvyklé populace daného druhu, se kterou se mikrobiolog denně setkává. V NRL/ATB byl uvnitř inhibiční zóny kolem disku s ciprofloxacinem zaznamenán růst kolonií ve tvaru loukotí kola (http://www.szu.cz/cem/ehk/ehk280/ehk280.htm). Toto zajímavé pozorování potvrdily i některé další laboratoře, které se účastnity EHK-280.

Kmen pro kontrolu kvality H. influenzae CNCTC 5063 (č. 5) byl zařazen do EHK opakovaně, naposledy v EHK-182 v roce 1999 [3]. Srovnání výsledků tohoto kmene ukazuje téměř identický počet laboratoří se správnými výsledky v EHK-182 a EHK-280 u vyšetření citlivosti k tetracyklinu (97.1%, respektive 97.2%) a ke ko-trimoxazolu (99%, respektive 98.1%). Výrazné zlepšení bylo zaznamenáno u výsledků vyšetření citlivosti k ampicilinu. Přesto, že v EHK-280 nerozpoznalo tuto 9.3% laboratoří, je to podstatně méně než téměř 30% laboratoří, které tuto neenzymatickou rezistenci nerozpoznaly v roce 1999.

 

Literatura

 [1] Urbášková P. Rezistence bakterií k antibiotikům. Vybrané metody. Trios 1998.

[2] National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; ninth informational supplement. NCCLS document M100-S9. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Pa;1999.

[3] EHK – 182. Bakteriologická diagnostika – vyhodnocení. Zprávy CEM 1999;8(11):434-437.

 
MUDr. Helena Žemličková
RNDr. Pavla Urbášková, CSc.

 

.