Zprávy CEM (SZÚ, Praha) 2001; 11(3):124-127.

 

Dominantní činnost NRL oboru epidemiologie a mikrobiologie v roce 2001

Část I: NRL v CEM

 

Desetiřádková sdělení vypracovali vedoucí jednotlivých NRL, jako součást výročních zpráv

 

NRL pro streptokoky a enterokoky

1) Zjištění mikrobiologických a epidemiologických dat potřebných pro formulaci programu prevence časných novorozeneckých infekcí (EOD) vyvolaných S.agalactiae: aktivní surveillance EOD, zjištění nosičství S.agalactiae ve vagině a rektu u gravidních žen.  2) Vývoj metody pro molekulární typizaci kmenů S.agalactiae.  3) Emm typizace kmenů S.pyogenes. 4) Monitorování výskytu sérotypů S.pneumonie  pro zajištění efektivní aplikaci typově specifických pneumokokových vakcín.  5) Stanovení titru postvakcinačních typově specifických pneumokokových protilátek v  sérech vakcinovaných jedinců. 6) Příprava náležitostí potřebných pro splnění akreditačního řízení.

NRL prošla akreditačním řízením ČIA podle normy ČSN EN ISO/IEC 17025  a bylo jí vydáno osvědčení o akreditaci.

 

NRL pro chřipku

-     program surveillance ARO v ČR i v rámci mezinárodní spolupráce

-     testování nově izolovaných kmenů chřipky  vůči některým antivirotikum

-     zkvalitňování rychlé diagnostiky chřipky včetně testování nových komerčních souprav 

       produkce dg antigenů a setů

-      NRL je aktivně zapojena do evropského systému surveillance chřipky (EISS - jsme

       rovnoprávným členem skupiny od roku 1997), dále NRL zapojena do programu WHO 

       (FLU-NET atp.)

 

NRL pro nechřipkové respirační viry

-     program surveillance ARO v CR i v rámci mezinárodní spolupráce

-  zkvalitňování rychlé diagnostiky nechřipkových respiračníchvirů, testování nových komerčních diagnostických souprav

-    produkce diagnostických antigenů do EIA setů

-    NRL je zapojena do evropského systému surveillance chřipky (EISS), kde je hlášen rovněž výskyt RSV

 

NRL pro zarděnky, spalničky, parotitidu a parvovirus B 19  

Hodnocení komerčních diagnostických souprav formou expertizní činnosti.Vypracování návrhů postupů pro ověřování funkční způsobilosti „in vitro“ diagnostických prostředků

pro diagnostiku zarděnek. Příprava vzorků pro EHK a vyhodnocování výsledků.Účast v programu externího hodnocení kvality v lékařských laboratořích INSTAND, NSR.Účast  ve studii ESEN 2-WP 1(MMR).Ověřování metody pro stanovení avidity IgG protilátek proti viru zarděnek.Zavedení PCR pro průkaz  parvoviru B 19.Účast na připomínkovém řízení návrhu „Surveillance spalniček v ČR ve fázi eliminace.Příprava podkladů pro dílčí úkol WHO dokumentu „Zdraví pro všechny v 21.století“. Postgraduální výchova v oblasti teratogenních virů. Příprava odborných materiálů a poskytování konzultací pro vypracovávání diplomových

prací studentů 3.LF UK.

 

 

 

NRL pro chlamydie

Činnost laboratoře byla zaměřena na vyšetřování pacientů se širokým spektrem klinických symptomů respiračního a urogenitálního traktu, systémových chorob za použití testů prokazujících antigen či DNA příslušného agens a sérologických testů (detekce rodově specifických a druhově specifických protilátek). V květnu proběhlo 5. kolo EHK-sérologie chlamydií, zúčastnilo se 47 laboratoří. V prosinci se konala Chlamydiová konference s mezinár.účastí (250 účastníků), naše NRL byla jeden z hlavních organizátorů. Podíleli jsme se na postgraduální výchově (3 akce). Diplomantka 5.ročníku přírodovědecké fakulty UK v Praze se na našem pracovišti podílela na zavedení metody PCR pro průkaz DNA Ch.pneumoniae.

 

NRL pro toxoplasmózu

Vedle pravidelné expertizní, školící, konzultační, diagnostické a konfirmační činnosti NRL připravila a vyhodnotila dvě kola okružních vzorků pro 86 zúčastněných laboratoří, zaměřená na diagnostiku oční toxoplasmózy a na testy u žen plánujících otěhotnění.7. Konzultační den „Problémy toxoplasmózy“ navštívilo více než 90 účastníků. Novými diagnostickými metodami, jejichž prověřování v NRL začalo, jsou stanovení antitoxoplasmických IgE a kvantitativní stanovení IgG pro potřeby oftalmologického vyšetření. V International Journal for Parasitology vyšla publikace shrnující poznatky o epidemiologii toxoplasmózy v ČR.

 

NRL pro enteroviry

Vyšetřování případů  akutních chabých paréz u dětí  do 15 let věku.U každého případu jsou vyšetřeny 2 odběry stolic.V případě positivní identifikace polioviru jsou izolát  a původní vzorek stolice zaslány do Regionální referenční laboratoře v Helsinkách pro určení, zda se jedná o oslabený nebo divoký kmen polioviru.

Izolace a identifikace enterovirů z pacientských materiálů (stolice, likvory a výtěry krku) zasílaných do NRL.

Identifikace pozitivních izolátů ze všech laboratoří ČR zasílaných do NRL

Sledování výskytu enterovirů v odpadních vodách odebíraných z 8 míst ČR a ze 3 utečeneckých táborů

Vyšetřování protilátek proti poliovirům a ostatním enetrovirům u pacientů.

Laboratoř spolupracuje s Enterovirus Laboratory National Public Health Institute (KTL)                                       Mannerheimintie 166 Helsinki Finland.

 

 

NRL pro antibiotika

1. Surveillance antibiotické rezistence (AR) invazivních izolátů bakterií v ČR v rámci EARSS (European Antimicrobial Resistance Surveillance System)

2. Surveillance AR komunitních původců močových  a respiračních infekcí

3. Surveillance AR mimostřevních izolátů salmonel

4. Stopování MRSA (methicilin/oxacilin rezistentních stafylokoků) v českých nemocnicích

5. Analýza penicilinové a makrolidové rezistence pneumokoků a streptokoků

6. Příprava podkladů pro správnou antibiotickou praxi

 

NRL  Česká národní sbírka typových kultur

Sbírka kultur připravovala kmeny a hodnotící komentář (časopis Zprávy CEM) pro vnější hodnocení kvality EHK-Bakteriologická diagnostika. Sbírka kultur prováděla identifikaci neobvyklých patogenních mikroorganismů zasílaných z mikrobiologických pracovišť v ČR a ve spolupráci s NRL pro ATB identifikaci a uchování kmenů zasílaných do NRL ATB. CNCTC se podílela na lyofilizaci kmenů a sér pro potřeby NRL v rámci SZÚ. CNCTC distribuovala za finanční úhradu kmeny uvedené v katalogu Sbírky kultur.

 

NRL pro salmonely

1) Diagnostika a sérotypizace terénních aberantních kmenů a kmenů vzácně se vyskytujících. Sběr kmenů, jejich sérotypizace a biotypizace v rámci studie antibiotické rezistence kmenů izolovaných v populaci ČR (2500 izolátů)

2) Spolupráce s AS SZÚ při přípravě vzorků EHK.

3) Spolupráce na řešení grantového úkolu IGA: Analýza salmonelóz vyvolaných Slamonella Typhimurium ve vybraných lokalitách ČR pomocí subtypizačních metod (CHPŘ Brno)

4) Posuzování diagnostických souprav a testů pro identifikaci salmonel.

5) Účast v mezinárodním kontrolním systému EQAS (Dánsko, Holandsko)

 

NRL pro yersinie  a pasteurelly

1) Stanovení titru yersiniových protilátek v séru suspektních pacientů

2) Biochemická a serotypizační diagnostika kmenů yersinií

3) Přednášková a konzultační činnost

 

NRL pro stafylokoky

Dominovala referenční činnost. Bylo diagnostikováno 418 kmenů Staphylococcus aureus. Kmeny byly podrobeny základní fenotypizaci. Byl zjištěn fagotyp (asi polovina kmenů byla NT), dále produkce superantigenů (stafylokokové enterotoxiny A – E, TSST-1 a exfoliatiny) a slizu.  V loňském roce jsme potvrdili diagnózu Syndromu toxického šoku u třech případů a u několika případů puchýřnatého onemocnění novorozenců (včetně dvou epidemií). I vloni jsme přispěli k objasnění několika epidemií stafylokokové enterotoxikózy. Bylo diagnostikováno 313 koaguláza-negativních stafylokoků, izolovaných ze závažného klinického materiálu, z toho 2/3 z hemokultur. Podařilo se nám identifikovat několik druhů, které dosud v ČR nebyly popsány. Výsledky byly prezentovány na 10 akcích v ČR i ve SR. Pokračovala  spolupráce  s pracovišti PřF MU v Brně. 

 

NRL pro E.coli a shigely

1) Stanovení verocytotoxinu u suspektních kmenů E.coli O157 a non O157

2) Vyhledávání a vytvoření souboru kmenů pro studium kolicinotypie (sp. Kluyvera, sp. Leclercia)

3) Přednášková činnost

4) Spolupráce s mikrobiologickou laboratoří Univerzity v Münsteru (dr. Bielaszewska)

Adresa zahraničního pracoviště:

Institut für Hygiene, Robert-Koch str. 41

D-48149 Münster, Germany.

 

NRL  pro mykobakterie

Zajištění provozu Informačního systému bacilární tuberkulózy (ISBT) včetně vypracování Výroční zprávy o mykobakteriologické  diagnostice. Předávání dat  konzultantům oboru TRN při KHS za účelem porovnání databází ISBT a RT (Registr tuberkulózy). Spolupráce s Národní jednotkou dohledu nad tuberkulózou při FN Bulovka, vzájemná výměna podkladů  a údajů  pro program EuroTB.

Zkušební provoz automatického detekčního systému Bactec MGIT960 (Becton Dickinson)- izolace mykobakterií , standardizované testy  lékové citlivosti. 

Ověřování  citlivosti na antituberkulotika  u  kmenů Mycobacterium tuberculosis izolovaných v r. 2001 v ČR. Stanovení  minimálních inhibičních koncentrací  na jiné antibakteriální léky mikrodiluční metodou u rezistentních kmenů.

Účast v mezinárodním externím hodnocení kvality  v rámci projektu CDC Atlanta a v rámci EHK supranacionálních referenčních laboratoří WHO/IUATLD.

 

NRL pro virové hepatitidy

NRL-VH testovala a vydala  doporučení ke schválení 43 souprav pro stanovení markerů virových hepatitid. NRL-VH  připravila a vyhodnotila celkem 6 sérií kontrolních vzorků pro systém externího hodnocení kvality (EHK) pro markery HBV, HAV a screeningové HIV, HBV, HCV. NRL-VH prováděla centrálně povinná konfirmační vyšetření HCV a HBV pro transfúzní službu a vyžádaná konfirmační vyšetření pro laboratoře vyšetřující markery virových hepatitid. NRL-VH  zavedla do rutinní diagnostické praxe metody na stanovení IgM anti-HEV, HDV RNA a HGV RNA. NRL-VH  se úspěšně prošla  mezinárodními kontrolami kvality pro serologii virových hepatitid A-E  (INSTAND, SRN) a NAT (EDQM, EU).  NRL-VH se akreditovala u ČIA jako součást tzv. Laboratoří CEM.

 

NRL pro meningokokové nákazy

Bylo pokračováno v aktivní surveillance invazivního meningokokového onemocnění v České republice. Byl zjištěn mírný vzestup počtu onemocnění a zvýšená smrtnost oproti předchozímu roku. Detailní určení antigenních a genetických vlastností N. meningitidis (WCE, MLEE, PFGE, MLST) ukázalo, že převládá sérologická skupina B a většina kmenů nenáleží do hypervirulentní linie ET-15/37. Ve spolupráci s NRL pro ATB byla zjištěna přetrvávající dobrá citlivost meningokoků na antibiotika, což umožňuje pokračování současné profylaktické i terapeutické strategie. Byla rozšířena metoda PCR diagnostiky o detekci H. influenzae a S. pneumoniae a spolu s detekcí N. meningitidis je v NRL rutinně požívána. Ve spolupráci s MÚ AV ČR byla vypracována originální metoda sekvenační typizace (MLST) meningokoků z PCR produktů. NRL získala akreditaci ČIA.

 

NRL pro Lymeskou borreliózu

Vyšetřili jsme sérologicky a PCR  vzorky likvorů neurologických pacientů (› 2400) a prokázali agens u 35% pacientů. Imunocytochemicky jsme zjistili polymorfismus borrelií  vlivem podmínek prostředí, které experimentálně ověřujeme v novém médiu, které jsme zkonstruovali. Původcem jarních a podzimních meningitid a encefalomeningitid  ve východočeském kraji  ( › 400 případů) byla Borrelia garinii-typ IV a V, geneticky a morfologicky alterované formy , velké 0.5-1.2μm, které jsme prokázali  v likvorech.

Přímou PCR- sekvenační metodou jsme zjistili prevalenci B.burgdorferi sensu stricto v Praze, Příbrami, Hořovicích, ve východočeském kraji B.garinii-typ IV,V a ojediněle III, na Moravě je infekce smíšená . B.afzelii-typ II se vyskytuje sporadicky, především v západočeském kraji. Po epidemiologických souvislostech se pátrá. U tažných ptáků  ( vyšetřeno 86 ) a členovců

( vyšetřeno 2000) převládá infekce B.garinii ( 46% infikovaných).

Coinfekci s r.Ehrlichia jsme prokázali u pacientů (HGE a HME agens), dále u ptáků, koní, lovné zvěře ( E.phagocytophila) a u klíšťat. Sledovali jsme vývojový cyklus klíšťat a podmínky přenosu agens v experimentálních chovech. Byly vypracovány 2 letáky: „ Chraňte se před klíšťaty“ a „Klíště není náš kamarád“ pro dospělou a dětskou populaci. Pokračuje spolupráce s CDCP, členství v LD fondation (USA), JSTD a Emerging Infectious Diseases.

 

NRL pro  AIDS 

1.      Referenční činnost - identifikace (konfirmace) nových případů HIV/AIDS v ČR, monitorování progrese infekce u HIV infikovaných osob, zjišt'ování rezistence HIV kmenů na antiretrovirové preparáty

2.      Epidemiologická surveillance HIV - monitorování výskytu a šíření HIV/IADS v ČR, aplikace metod molekulární epidemiologie

3.      Metodická a kontrolní činnost - školení terénních pracovníků, příprava a hodnocení EHK

4.      Expertizní činnost - evaluace komerčních testů pro diagnostiku HIV/AIDS

5.      Výzkumná činnost - 2 projekty IGA MZ ČR, 1 projekt EU, výzkumný záměr v rámci, SZÚ

6.      Osvětová činnost - udržování www stránek s informacemi o výskytu HIV/AIDS v ČR, osvětové programy pro různé populační skupiny

7.      Pedagogická činnost - pre i postgraduální

8.      Mezinárodní spolupráce - program EU "EuroHIV"

 

NRL pro analýzu epidemiologických dat

NRL nadále spolupracovala s HS ČR na zajištění zákonného hlášení infekcí na území České republiky. Epidat byl v roce 2001 registrován Úřadem pro ochranu osobních údajů. Bylo v něm  evidováno dalších  cca 140000 infekcí. Databáze centra,  ve které je více než 2 miliony onemocnění, byla v průběhu roku upravena pro potřeby nového správního členění republiky. Ve spolupráci s MZ ČR a oddělením biostatistiky SZÚ byla vytvořena nová internetovská aplikace hlášení akutních respiračních onemocnění a ve spolupráci se SW komisí Epidatu byla připravena nová verze Epidatu pro rok 2002. NRL průběžně poskytovala datovou podporu projektům SZÚ a HS. Analytická práce se opírala o rozbory sezónní a věkové struktury trendů nemocnosti, servisní práce o týdenní a měsíční přehledy nemocnosti distribuované formou Zpráv CEM.  Pracovníci NRL se v průběhu roku zapojili konkrétními činnostmi do projektů WHO "Zdraví pro všechny v 21. století", NEHAP, BWC a do některých informačních systémů WHO a EU.

 

NRL pro dezinfekci a sterilizaci

NRL byla akreditovaná. Účastnila se EHK - sterilizace.

V rámci placené expertizní činnosti  vypracovala podklady pro schvalovací řízení MZ ČR k výrobě, distribuci, dovozu dezinfekčních přípravků a uvedení sterilizátorů, obalových materiálů a indikátorů sterilizace na tuzemský trh. Posuzovala napadení různých objektů  houbami a doporučovala postupy dezinfekce, hodnotila odolnost materiálů k dezinfekčním přípravkům a odolnost bakterií k dezinfekčním přípravkům.

Podílela se na metodickém vedení hygienické služby a pracovníků provádějících dezinfekci a sterilizaci v rámci pregraduální, postgraduální výchovy a rekvalifikací. Spolupracuje při zavádění novinek z oboru do praxe se Společností pro nemocniční hygienu, IPVZ Praha, IPVZ SZP Brno, Sdružení DDD, byl uspořádán Konzultační den v DDD. Rozsáhlá je konzultační a publikační činnost.

 

NRL pro dezinsekci a deratizaci

NRL ověřovala, formou placených expertiz, účinnost přípravků pro ochrannou dezinsekci a deratizaci, které byly předloženy hlavnímu hygienikovi ČR k povolení. Ve spolupráci se Sdružením DDD při ČSVTS se formou odborných přednášek podílela na zajišťování kvalifikace ve smyslu zákona 258/2000 Sb. pro výkonné pracovníky, kteří poskytují služby v ochranné dezinsekci a deratizaci podle živnostenského zákona. Podílela se na vzdělávání pracovníků státní správy v ochranné dezinsekci a deratizaci. Jako každoročně, NRL připravila a publikovala seznam přípravků povolených hlavním hygienikem ČR pro ochrannou dezinsekci a deratizaci k 1.1.2002. Z pověření hlavního hygienika ČR se podílela  na přípravě návrhu zákona "o podmínkách uvádění biocidů na trh" a na přípravě návrhu změny zákona

o ochraně veřejného zdraví (změny v zákonu  č. 274/2001 Sb.).

 

NRL pro přímou diagnostiku virů, bakterií a cizorodých buněk v klinickém materiálu pomocí elektronové mikroskopie

Elektron-mikroskopicky byly v krvi a v mozkomíšním moku pacientů (› 1000 ) vyšetřených metodou negativního barvení prokázány nejčastěji viry č.Herpesviridae a Picornaviridae. V kostní dřeni a u transplantovaných pacientů byly zjištěny Parvoviridae a Papovaviridae. V průjmových stolicích novorozenců byly rotaviry a caliciviry. V likvorech u 45% pacientů s meningitidou a encefalomeningitidou ( vyšetřeno 400 případů) byly zjištěny organismy (› 10 na zorné pole při zv 10 000 x) velikosti  0.50 – 1.4 μm. Morfologicky, experimentálně a analyzou DNA restrikčními enzymy  byly organizmy určeny jako mladé, nově rozdělené borrelie. Tyto 2-3μm dlouhé, 0.18 μm silné formy rostoucích borrelií mají poloviční počet diferencujících se bičíků, proto jsou málo pohyblivé. Tenký vnější obal neobsahuje OspA antigen. Vlivem nevhodných podmínek prostředí ( protilátky, lysozym) se stáčí do „ klubíčka“ a postupně je destruován vnitřní obsah nehráněný vnějším obalem .Tím vzniká dvojitou membránou ohraničené  granulum. Tyto formy nelze diagnostikovat světelným mikroskopem.

Přímý průkaz koinfekce r.Borrelia a r.Ehrlichia byl prokázán u pacientů, klíšťat a zvířat, především u tažných ptáků (divoká kachna, husa, volavka, kos, vrána, rackové). Morfologicky a sekvenací DNA byla ověřena HGE agens a E.phagocytophila. 

 

NRL pro leptospiry.

Dominantní  činnost NRL spočívala v přípravě a výrobě živých antigenů pro diagnostické účely vlastní a pto potřeby sérologické diagnostiky leptospirózy v laboratořích hygienické služby a veterinární služby v ČR. V NRL je udržován genofond národní sbírky leptospiorvých kultur ČR. Vyrobená hyperimunní séra jsou užívána k externímu hodnocení kvality (EHK) a úrovně rutinní diagnostiky v terénních laboratořích HS i pro diagnostiku a konfirmaci klinického materiálu v NRL. V rámci sledování přírodní ohniskovosti leptospirózy jsou ve spolupráci s KHS a VFU Brno vyšetřováni drobní savci z oblastí epizootií. Kromě metodické spolupráce s pracovišti HS provádí NRL přednáškovou, doškolovací konziliární a publikační činnost v dané problematice a celorepublikový monitoring nákazy. Byla navázána spolupráce s mikrobiology PřF MU v Brně k využití chemotaxonomických metod k diagnostice leptospirózy.

 

NRL pro herpetické viry

Vyšetřování  vzorků od pacientů pro zdravotnická zařízení – transplantovaní pacienti, HIV+, neurologičtí pacienti kojenci, speciální vyšetřovací metody. Příprava vzorků a vyhodnocování EHK – serologie EBV, HSV, VZV,identifikace virů .  Atesty komerčních diagnostických souprav.Výzkumná činnost: „Studium epidemiologie a patogenezy lidského herpetického viru 8 v ČR“ (grant IGA), „Studium vztahů herpetických virů k lidským onemocněním a možností jejich prevence“ (VZ MZ) – vývoj metod kvantifikace virového genomu v klinickém materiálu a jejich aplikace pro diagnostiku herpetických infekcí u imunodeficientních pacientů, studium seroprevalence herpetických virů u chronicky nemocných, diagnostický význam průkazu virové DNA v mozkomíšním moku u neurologických pacientů. Pedagogická a školící činnost – odborné semináře, přednášky, články, účast na konferencích, postgraduální kurzy pro IPVZ a odborné stáže, školení 3 aspirantů a jednoho studenta.

 

NRL pro hemofilové nákazy

1)       Monitorování vlastností kmenů izolovaných v mikrobiologických laboratořích (ověřování výsledků terénních laboratoří, biotypizace a serotypizace u Haemophilus influenzae).

2)       Spolupráce při zajišění surveillance programu invazivních onemocnení způsobených Haemophilus influenzae b v České republice.

3)       Spolupráce při řešení projektu NI / 6803-3 (IGA MZ ČR): „Studium vlastností kmenů Haemophilus influenzae získaných v celostátním programu surveillance".

4)       Typizace kmenů Haemophilus influenzae izolovaných z ušního aspirátu od dětí do dvou let věku pro vývoj nové hemofilové vakcíny - pilotní studie SmithKline Beecham                                         Biological.

5)       Stanovení hladiny protilátek vůči Haemophilus influenzae b metodou ELISA.      

6)       Metodická činnost.

7)       NRL patří mezi laboratoře CEM, které byly akreditovány ČIA podle ČSN EN ISD/IEC 17025.

 

Sdělení zbývajících laboratoří budou uveřejněna v následujícím čísle našeho časopisu.

 

Desetiřádková sdělení vypracovali

vedoucí jednotlivých NRL,

jako součást výročních zpráv.