Zprávy CEM (SZÚ, Praha) 2005; 14(8):393-395.

 

EHK – 432  Bakteriologická diagnostika – vyhodnocení

 

Helena Žemličková, Petr Petráš, Pavla Urbášková

 

celkové hodnocení identifikací

 

            Celkem byly rozeslány vzorky 114 laboratořím. 114 laboratoří odeslalo výsledek do závěrečného termínu. Za identifikaci signifikantního patogena ve 4 vzorcích mohly laboratoře získat maximálně 8 bodů, za vyšetření citlivosti 1 bod (vzorek 4). Bodování pro identifikaci bylo provedeno ve stupnici 2, 1, 0 a –1 bodů, pro vyšetření citlivosti ve stupnici 1 a 0 bodů. Všechny vzorky je možno hodnotit, neboť 100% z 20 laboratoří (20/20) s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok dosáhlo v EHK– 432 plný počet bodů.

 

 

Graf 1: Počet bodů za správnou identifikaci.       

 

Maximálního počtu bodů při identifikaci dosáhlo 104, tj. 91,2% laboratoří. Limit pro úspěšné absolvování byl 7,254 bodů, (aritmetický průměr minus dvě směrodatné odchylky,                   tj. 7,904 – (2x0,325) = 7,254). Tohoto limitu dosáhlo 104 laboratoří, 10 laboratoří tento limit nesplnilo.

Jeden bod při vyšetření citlivosti dosáhlo 113, tj. 99,1% laboratoří, 1 laboratoř bod nezískala.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Výsledky u jednotlivých vzorků

VZOREK 1: Hnis punktovaný z kyčelního kloubu.

 

Odpověď: Staphylococcus lugdunensis

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Staphylococcus lugdunensis

 

114

2

100%

Celkem

 

114

 

100%

 

Staphylococcus lugdunensis byl popsán francouzskými bakteriology v roce 1988 [1] . Jméno dostal podle latinského označení Lyonu (Lugdunum), kde byl poprvé izolován. Patří mezi koagulázanegativní stafylokoky, může však mít pozitivní test na clumping – faktor (tzn. vázanou koagulázu). Z tohoto důvodu bývá někdy omylem považován za kmen druhu S. aureus. V dlouhodobých tabulkách podílů identifikovaných kmenů, zaslaných do NRL pro stafylokoky z humánního klinického materiálu, se drží na šestém až osmém místě [2] . 

S.lugdunensis je typickým podmíněným patogenem, patří mezi agens vyvolávající nemocniční infekce. U oslabených pacientů může kromě toxikóz vyvolat v podstatě stejné onemocnění jako kmeny S. aureus. Často jsou popisovány katétrové sepse, endokarditidy, cystitidy, zhnisané operační rány, arthritidy [z recentních publikací např. 3, 4].

Vysokou četnost (44 %) kmenů S. lugdunensis mezi původci endokarditid vyvolaných koagulázanegativními stafylokoky uvádějí američtí autoři v práci [5].

Kmeny S. lugdunensis produkují řadu faktorů virulence. Především  je to  hemolyzin, který je velice příbuzný s delta-hemolyzinem S. aureus. Dále pak sliz, který kmenům umožňuje v podobě biofilmu kolonizovat katétry a jiné plastové terapeutické pomůcky. Může tak být vyvolána katétrová sepse, s dosti vysokým procentem mortality.

 

Zaslaný kmen měl všechny typické vlastnosti svého druhu. Kmeny S. lugdunensis lze snadno poznat podle produkce ornitindekarboxylázy. Prakticky pouze tento druh stafylokoka má reakci s ornitinem pozitivní (výjimkou je asi 5 % netypických kmenů S. epidermidis).     

 

LITERATURA

[1] Freney J, Brun Y, Bes M, et al. Staphylococcus lugdunensis sp. nov. and Staphylococcus schleiferi sp. nov., two species from human clinical specimens. Int J Syst Bacteriol 1988; 38:  168-172.

[2] Votava M, Rod Staphylococcus, in: Lékařská mikrobiologie speciální, M. Votava a kolektiv, Neptun, Brno 2003, str. 107.

[3] Seifert H, Oltmanns D, Becker K, et al. Staphylococcus lugdunensis pacemaker-related Infection Emerg Infect Dis. 2005; 11(8): 1316–8.

[4] Ebright JR, Penugonda N, Brown W. Clinical experience with Staphylococcus lugdunensis bacteremia: a retrospective analysis. Diagn Microbiol Infect Dis. 2004; 48: 17–21.

[5] Patel R, Piper KE, Rouse MS, Uhl JR, Cockerill FR 3rd, Steckelberg JM. Frequency of isolation of Staphylococcus lugdunensis among staphylococcal isolates causing endocarditis: a 20-year experience. J Clin Microbiol. 2000; 38: 4262–3.

 

 

 

 

Vzorek 2: Izolát z bronchoalveolární laváže od pacienta s ventilátorovou pneumonií.

Odpověď: Pseudomonas stutzeri

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Pseudomonas stutzeri

 

107

2

93,9%

Alcaligenes xylosoxidans

 

 3

1

2,6%

 

Pseudomonas sp.          

 

 1

1

0,9%

Pseudomonas alcaligenes

 

 1

1

0,9%

Ralstonia pickettii

 

 1

1

0,9%

patogen nenalezen

 

 1

0

0,9%

Celkem

 

    114

 

100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 19 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

Kmen Pseudomonas stutzeri byl již jednou zařazen do systému EHK–Bakteriologická diagnostika (EHK–64). V identifikaci tohoto species došlo k významnému zlepšení, neboť P. stutzeri určilo v této sérii správně 93,9% laboratoří oproti 58,1% správných výsledků v EHK–64.

Předložený kmen je typový kmen P. stutzeri, ATCC 17588. Kolonie jsou nažloutlé, kmen okyseluje glukózu, maltózu, fruktózu a xylózu. Typický morfologický vzhled kolonií P. stutzeri (hrubý zvrásnělý povrch) ovšem nebyl tak výrazný a bylo možno jej přehlédnout. I přesto, plného počtu bodů dosáhlo 107 zúčastněných laboratoří.

 

VZOREK 3: Stolice od pacienta s průjmem, křečemi břicha a horečkou.

 

Odpověď: Shigella sonnei

Vzorek dále obsahoval: Enterococcus faecalis, Klebsiella oxytoca

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Shigella sonnei

 

114

2

100%

Celkem

 

114

 

100%

 

Izolace a identifikace Shigella sonnei ze vzorku č. 3 nečinila laboratořím žádné obtíže a všichni účastníci obdrželi plný počet bodů.

 

 

 

 

Vzorek 4: Izolát z hemokultury od pacienta s podezřením na endokarditidu.

Odpověď: Streptococcus bovis

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Streptococcus bovis

 

    114

     2

  100%

Celkem

 

    114

 

  100%

 

 

Požadavek byl identifikovat druh zaslaného kmene a vyšetřit jeho citlivost k penicilinu a ke gentamicinu. Kmen 4 je Streptococcus bovis NRL/ATB 2458/04, izolovaný v jedné fakultní nemocnici z krve od 58letého pacienta s vegetací na aortální chlopni. Vzhledem k tomu, že viridující streptokoky jsou obvyklou příčinou infekční endokarditidy, lze hodnotit výsledky vyšetření citlivosti u všech 114 zúčastněných laboratoří - i když tři z nich nesprávně identifikovaly kmen 4 jako jiné viridující streptokoky než S. bovis. Jedna laboratoř kmen 4 chybně označila jako rezistentní k penicilinu. Výsledky vyšetření citlivosti ke gentamicinu se nehodnotí. V tabulce 1 jsou limitní hodnoty minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny streptokoků, hodnoty MIC naměřené v NRL pro antibiotika a výsledky laboratoří v kategorii citlivosti a rezistence.

 

Tabulka 1. Výsledky vyšetření citlivosti kmene  4 Streptococcus bovis

 

 

Antibiotikum

MIC (mg/l)

Správné výsledky

limit pro citlivé streptokoky

hodnoty naměřené 

v NRL*

kategorie

Počet

 laboratoří

 

%

 

penicilin

<=0,125  [1]

0,063 – 0,063

C

113/114

99,1

gentamicin**

<=4 [2]

4 - 4

C

nehodnotí se

-

 

*) 3 měření diluční mikrometodou (půda: MH bujon s 3% lyzátem koňské krve)

**) obecný limit pro kmeny citlivé ke gentamicinu [2]

C: citlivý.

 

 

Vzorek 5:  Listeria monocytogenes – výukový vzorek

 

Kmen 5 je Listeria monocytogenes NRL/ATB 312/04, izolát z mozkomíšního moku 3leté holčičky. Kmen, zařazen jako výukový, byl citlivý k penicilinu i ke gentamicinu. V tabulce 2 jsou limitní hodnoty minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny a hodnoty MIC naměřené v NRL/ATB.

 

Tabulka 2. Výsledky vyšetření citlivosti u kmene 5 L. monocytogenes  

 

 

Antibiotikum

MIC (mg/l)

kategorie

limit pro citlivé listerie

hodnoty naměřené  v NRL*

penicilin

<= 2  [1]

0,25 – 0,5

C

gentamicin

<=4 [2]

0,063 – 0,063

C

 

*) 3 měření diluční mikrometodou (půda: MH bujon s 3% lyzátem koňské krve)

**) obecný limit pro kmeny citlivé ke gentamicinu [2]

C: citlivý.

 

Komentář

Streptococcus bovis a Listeria monocytogenes  patří mezi druhy, u nichž nejsou k dispozici interpretační kritéria pro diskovou difusní metodu. Metodou volby je vyšetření MIC antibiotik. Oba druhy jsou však pravidelně citlivé k penicilinu (a tudíž také k ampicilinu) [3, 4], které jsou u invazivních infekcí způsobených streptokoky nebo listeriemi léky volby [5]. Vyšetření citlivosti slouží tudíž spíše ke konfirmaci zvoleného postupu. K dosažení synergického účinku se při léčbě listeriových infekcí doporučuje k ampicilinu přidat gentamicin vždy [4, 5].  U invazivních streptokokových infekcí se doporučuje gentamicin přidat jen tehdy, je-li zjištěno u vyšetřovaného kmene MIC penicilinu > 0,125 mg/l; v tom případě se postupuje jako u enterokoků a proto je zapotřebí také vyšetřit stupeň rezistence ke gentamicinu [3]. Kmeny S. bovis i L. monocytogenes, zařazené do této série EHK, byly inhibovány gentamicinem v koncentraci <= 4 mg/l,  to znamená, že byly citlivé ke gentamicinu podle kritérií pro jiné kmeny, které uvádí EUCAST (European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing) [2].

 

LITERATURA

[1]  Clinical Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; fifteenth informational supplement. CLSI Document M100-S15 (ISBN 1-56238-556-9). USA, 2005.

[2] Aminoglycosides - EUCAST clinical MIC breakpoints

(http://www.srga.org/eucastwt/MICTAB/index.html)

[3] Durack DT. Endocarditis. In: Finch RG, Greenwood D, Norrby SR, Whitley RJ (eds). Antibiotic and Chemotherapy. 8th edition, Churchill Livingstone 2003; str. 657-666.

[4]  Ziglam HM, Finch RG. Bacterial infections of central nervous system. In: Finch RG, Greenwood D, Norrby SR, Whitley RJ (eds). Antibiotic and Chemotherapy. 8th edition, Churchill Livingstone 2003; str. 708-723.

[5] Hoza J, Jindrák V, Marešová V, Nyč O, Sechser T, Suchopár J, Švihovec J, Urbášková P. Konsensus používání antibiotik I. Penicilinová antibiotika. Praktický lékař 2002; 82:247-306.

 

 

Helena Žemličková

Pavla Urbášková

Petr Petráš

SZÚ - CEM