Zprávy CEM (SZÚ, Praha) 2005; 14(12):567-569.

 

EHK–454 Bakteriologická diagnostika-vyhodnocení

 

Helena Žemličková, Pavla Urbášková

 

celkové hodnocení identifikací

 

            Celkem byly rozeslány vzorky 115 laboratořím. 115 laboratoří odeslalo výsledek do závěrečného termínu. Za identifikaci signifikantního patogena ve 4 vzorcích mohly laboratoře získat maximálně 8 bodů, za vyšetření citlivosti 1 bod (vzorek 4). Bodování pro identifikaci bylo provedeno ve stupnici 2, 1, 0 a –1 bodů, pro vyšetření citlivosti ve stupnici 1 a 0 bodů.

 

 

Graf 1: Počet bodů za správnou identifikaci       

 

Maximálního počtu bodů při identifikaci dosáhlo 101, tj. 87,8% laboratoří. Limit pro úspěšné absolvování byl 7,254 bodů, (aritmetický průměr minus dvě směrodatné odchylky,  tj. 7,817 – (2 x 0,523) = 6,771). Tohoto limitu dosáhlo 108 laboratoří, 7 laboratoří tento limit nesplnilo. Plný počet bodů (4 body) při vyšetření citlivosti získaly všechny laboratoře.

 

 

 

 

 

Výsledky u jednotlivých vzorků

VZOREK 1: Izolát z krve od imunosuprimovaného pacienta.

 

Odpověď: Lactobacillus plantarum

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Lactobacillus species

 

101

2

87,8%

Lactobacillus plantarum

 

    8

2

     7%

Lactobacillus catenaforme

 

    1

1

     0,9%

Lactobacillus casei

 

    1

1

  0,9%

Corynebacterium aquaticum

 

    2

0

  1,7%

Listeria monocytogenes

 

    1

0

  0,9%

Nocardia asteroides

 

    1

0

  0,9%

Celkem

 

115

 

 100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 20 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

Kmen Lactobacillus plantaris, identický se vzorkem zaslaným v této sérii EHK, byl zařazen jako edukativní vzorek v EHK-398. V komentáři k této EHK lze také najít návod k identifikaci tohoto druhu, respektive rodu, neboť rodová identifikace je vzhledem k obtížné podrobné identifikaci dostačující pro získání plného počtu bodů. Pouze 4 laboratoře kmen neidentifikovaly jako Lactobacillus. Corynebacterium i Listeria jsou obě Gram-pozitivní tyčinky, mají ovšem distinktní makroskopickou morfologii a pozitivní test katalázy. Leifsonia aqutica Nocardia asteroides má naprosto typickou morfologii kolonií - vzdušné mycelium silně adherující k podkladu. Podrobný návod k identifikaci nokardií bude uveden v komentáři k příští sérii EHK.

Poz. Corynebacterium aquaticum bylo reklasifikováno jako Leifsonia aquatica. Rod Leifsonia sdružuje „Corynebacterium aquaticum“ a set koryneformních bakterií, které byly izolovány z kořenových výrůstků trávy Poa annua infikovaných hlístem Subanguina radicola [1]. Přístup k aktuální bakteriální nomenklatuře je k dispozici na stránkách německé sbírky kultur (DSMZ), www. dsmz.de/microorganisms/main.php?menu_id=2.

 

LITERATURA

 

 [1] Evtushenko LI, Dorofeeva LV, Subbotin SA, Cole JR, Tiedje JM. Leifsonia poae gen. nov., sp. nov., isolated from nematode galls on Poa annua, and reclassification of „Corynebacterium aquaticum“ Leifson 1962 as Leifsonia aquatica (ex Leifson 1962) gen. nov., nom. rev., comb. nov. and Clavibacter xyli Davis et al. 1984 with two subspecies as Leifsonia xyli (Davis et al. 1984) gen. nov., com. nov. Int J Sys Evol Microbiol, 2000; 50: 371-380.

 

 

 

Vzorek 2: Hnis z abscesu vzniklého po cholecystectomii.

 

Odpověď: Staphylococcus aureus + Bacteroides fragilis

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Staphylococcus aureus + Bacteroides fragilis

 

108

2

93,9%

Staphylococcus aureus + Bacteroides species

 

    3

2

  2,6%

Staphylococcus sciuri + Bacteroides fragilis

    1

1

  0,9%

 

Staphylococcus aureus

 

    2

0

  2,6%

Bacteroides fragilis

 

    1

0

  0,9%

Celkem

 

     115

 

100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 19 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

Shodný vzorek obsahující obě agens, Staphylococcus aureus a Bacteroides fragilis, byl zaslán v EHK–182, kde získalo plný počet bodů 91% laboratoří. Z výsledků je patrno, že došlo k nárůstu úspěšnosti při izolaci a identifikaci obou patogenů. Dvě laboratoře určily jako vyvolávající agens pouze S. aureus, patrně v důsledku kultivace vzorku jen při aerobních podmínkách.

 

 

VZOREK 3: Stolice od dětského pacienta s průjmem s příměsí krve a horečkou.

Odpověď: Escherichia coli O157

Vzorek dále obsahoval: E. coli (nepatogenní), Serratia rubidea

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Escherichia coli O157

 

115

2

100%

Celkem

 

115

 

100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 20 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

Identifikace Escherichia coli O157 nečinila laboratořím žádné obtíže. Všechny laboratoře získaly plný počet bodů.

 

 

 

 

 

Vzorek 4: Izolát z krve od pacienta z JIP.

 

Odpověď: Kluyvera ascorbata

 

 

identifikace

 

frekvence

body

procento

Kluyvera ascorbata

 

    111

     2

   96,5%

Kluyvera species

 

        4

     1

     3,5%

Celkem

 

    115

 

  100%

Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 19 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.

 

Požadavek byl identifikovat druh zaslaného kmene a vyšetřit jeho citlivost k cefotaximu a ke gentamicinu. Kmen 4 je Kluyvera ascorbata (NRL/ATB 5473/05), rezistentní k cefotaximu (v důsledku inherentní produkce širokospektré b-laktamázy) a je citlivá ke gentamicinu. Kluyvera ascorbata byla zaslána k identifikaci v počátcích EHK, (EHK-19), kde kmen určilo správně pouze 55% laboratoří. K. ascorbata je oportunním patogenem, který může být izolován z relevantních klinických materiálů, (nejčastěji ze sputa, moči a krve). K. ascorbata je možné od K. cryocrescens odlišit pozitivním askorbátovým testem, neschopností růstu při 5 °C a menší inhibiční zónou kolem disku s cefalotinem (30 mg) [1].

 

Všech 115 laboratoří vyšetřilo citlivost správně. Celkové výsledky vyšetření citlivosti jsou v tabulce 1, která obsahuje také limitní hodnoty průměrů inhibičních zón (IZ) a minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny gramnegativních tyčinek, hodnoty naměřené v NRL pro antibiotika a výsledky laboratoří v kategorii citlivosti a rezistence u kmene 4.

 

Tabulka 1. Výsledky vyšetření citlivosti kmene  4 Kluyvera ascorbata

 

 

Antibiotikum

Průměry IZ (mm)

MIC (mg/l)

Správné výsledky

limit pro citlivé G-T

[2]

rozmezí hodnot naměřených

v NRL*

limit pro citlivé G-T

 [2]

hodnoty naměřené

 v NRL**

katego-rie

[2]

počet laboratoří

 

%

 

cefotaxim

>=18

10 - 12

<= 4

> 32

R

115/115

100,0

gentamicin

>=15

19 - 20

<= 4

<= 0,25

C

115/115

100,0

 

*) 5 měření diskovou difuzní metodou; obsah disků: cefotaxim 30 ug, gentamicin 10 ug;

**) 3 měření diluční mikrometodou;

C: citlivý, R: rezistentní.

 

 

Vzorek 5:  Shigella sonnei

 

U kmene 5 Shigella sonnei (NRL/ATB 5036/05) byl požadavek na vyšetření citlivosti k ampicilinu a chloramfenikolu. Všech 115 laboratoří správně označilo kmen 5 jako rezistentní k ampicilinu a citlivý k chloramfenikolu. Celkové výsledky vyšetření citlivosti jsou v tabulce 2, která obsahuje také limitní hodnoty průměrů inhibičních zón (IZ) a minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny gramnegativních tyček, hodnoty naměřené v NRL pro antibiotika a výsledky laboratoří v kategorii citlivosti a rezistence u kmene 5.

 

Tabulka 2. Výsledky vyšetření citlivosti u kmene 5 S. sonnei

 

 

Antibiotikum

Průměry IZ (mm)

MIC (mg/l)

Správné výsledky

limit pro citlivé G-T

[2]

rozmezí hodnot naměřených

v NRL*

limit pro citlivé G-T

 [2]

hodnoty naměřené

 v NRL**

katego-rie

[2]

počet laboratoří

 

%

 

ampicilin

>= 17

6 - 6

<= 8

> 64

R

115/115

100,0

chloramfenikol

>= 18

25 - 26

<= 8

1 - 2

C

115/115

100,0

 

*) 5 měření diskovou difuzní metodou; obsah disků: ampicilin 10 ug, chloramfenikol 30 ug;

**) 3 měření diluční mikrometodou;

C: citlivý, R: rezistentní.

 

 

KOMENTÁŘ

 

V sérii EHK-442 dosáhly všechny laboratoře plný počet bodů vyšetření citlivosti.  Pro informaci lze uvést, že Kluyvera ascorbata inherentně produkuje enzym označovaný jako cefotaximáza-M, který je schopen velmi rychlého šíření, zejména v komunitě. Cefotaximáza produkovaná K. ascorbata patří do početné skupiny cefotaximáz, enzymů nepříbuzných s jinými širokospektrými b-laktamázami [3].

 

LITERATURA

 

[1]  Farmer III JJ , Fanning GR, Huntley-Carter GP, et al. Kluyvera, a new (redefined) genus in the family Enterobacteriaceae: identification of Kluyvera ascorbata sp. nov. and Kluyvera cryocrescens sp. nov. in clinical specimens. J Clin Microbiol 1981; 13(5): 919-933.

[2]  Urbášková P. Rezistence bakterií k antibiotikům. Vybrané metody. ISBN 80-238-3106-2. TRIOS Praha 1998.

[3]  Bonnet R. Growing group of extended –spectrum b -lactamases: the CTX-M enzymes. Antimicrob Agents Chemother 2004; 48: 1-14.

 

MUDr. Helena Žemličková

RNDr. Pavla Urbášková, CSc.

SZÚ– CEM