Helena
Žemličková, Pavla Urbášková
celkové hodnocení identifikací
Celkem byly rozeslány vzorky 115 laboratořím. 115 laboratoří odeslalo
výsledek do závěrečného termínu. Za
identifikaci signifikantního patogena ve 4 vzorcích mohly laboratoře získat
maximálně 8 bodů, za vyšetření citlivosti 1 bod (vzorek 4). Bodování pro
identifikaci bylo provedeno ve stupnici 2, 1,
Graf
1: Počet bodů za správnou
identifikaci
Maximálního počtu bodů při identifikaci dosáhlo 101, tj. 87,8% laboratoří. Limit pro úspěšné absolvování byl 7,254 bodů, (aritmetický průměr minus dvě směrodatné odchylky, tj. 7,817 – (2 x 0,523) = 6,771). Tohoto limitu dosáhlo 108 laboratoří, 7 laboratoří tento limit nesplnilo. Plný počet bodů (4 body) při vyšetření citlivosti získaly všechny laboratoře.
Výsledky u jednotlivých vzorků
VZOREK
1: Izolát
z krve od imunosuprimovaného pacienta. |
Odpověď: Lactobacillus
plantarum |
identifikace |
frekvence |
body |
procento |
Lactobacillus species |
101 |
2 |
87,8% |
Lactobacillus plantarum |
8 |
2 |
7% |
Lactobacillus catenaforme
|
1 |
1 |
0,9% |
Lactobacillus casei
|
1 |
1 |
0,9% |
Corynebacterium aquaticum
|
2 |
0 |
1,7% |
Listeria monocytogenes
|
1 |
0 |
0,9% |
Nocardia asteroides
|
1 |
0 |
0,9% |
Celkem |
115 |
|
100% |
Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 20 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.
Kmen Lactobacillus
plantaris, identický se vzorkem zaslaným v této sérii EHK, byl zařazen
jako edukativní vzorek v EHK-398. V komentáři k této EHK lze
také najít návod k identifikaci tohoto druhu, respektive rodu, neboť
rodová identifikace je vzhledem k obtížné podrobné identifikaci
dostačující pro získání plného počtu bodů. Pouze 4 laboratoře kmen
neidentifikovaly jako Lactobacillus. Corynebacterium i Listeria
jsou obě Gram-pozitivní tyčinky, mají ovšem distinktní makroskopickou
morfologii a pozitivní test katalázy. Leifsonia
aqutica Nocardia asteroides má naprosto typickou morfologii kolonií
- vzdušné mycelium silně adherující k podkladu. Podrobný návod
k identifikaci nokardií bude uveden v komentáři k příští sérii
EHK.
Poz. Corynebacterium aquaticum bylo
reklasifikováno jako Leifsonia aquatica. Rod Leifsonia sdružuje „Corynebacterium
aquaticum“ a set koryneformních bakterií, které byly izolovány
z kořenových výrůstků trávy Poa annua infikovaných hlístem Subanguina
radicola [1]. Přístup k aktuální bakteriální nomenklatuře je
k dispozici na stránkách německé sbírky kultur (DSMZ), www.
dsmz.de/microorganisms/main.php?menu_id=2.
LITERATURA
[1] Evtushenko LI, Dorofeeva LV, Subbotin SA,
Cole JR, Tiedje JM. Leifsonia poae gen. nov., sp. nov., isolated from
nematode galls on Poa annua, and reclassification of „Corynebacterium
aquaticum“ Leifson 1962 as Leifsonia aquatica (ex Leifson
1962) gen. nov., nom. rev., comb. nov. and Clavibacter xyli Davis et
al. 1984 with two subspecies as Leifsonia xyli (Davis et al.
1984) gen. nov., com. nov. Int J Sys Evol
Microbiol, 2000; 50: 371-380.
Vzorek 2: Hnis z abscesu vzniklého po cholecystectomii. |
Odpověď: Staphylococcus aureus +
Bacteroides fragilis |
identifikace |
frekvence |
body |
procento |
Staphylococcus aureus + Bacteroides fragilis |
108 |
2 |
93,9% |
Staphylococcus aureus + Bacteroides species |
3 |
2 |
2,6% |
Staphylococcus sciuri + Bacteroides fragilis |
1 |
1 |
0,9% |
Staphylococcus aureus
|
2 |
0 |
2,6% |
Bacteroides fragilis |
1 |
0 |
0,9% |
Celkem |
115 |
|
100% |
Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 19 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.
Shodný vzorek obsahující obě agens, Staphylococcus aureus a Bacteroides fragilis, byl zaslán v EHK–182, kde získalo plný počet bodů 91% laboratoří. Z výsledků je patrno, že došlo k nárůstu úspěšnosti při izolaci a identifikaci obou patogenů. Dvě laboratoře určily jako vyvolávající agens pouze S. aureus, patrně v důsledku kultivace vzorku jen při aerobních podmínkách.
VZOREK 3: Stolice od
dětského pacienta s průjmem s příměsí krve a horečkou. |
Odpověď: Escherichia
coli O157 Vzorek
dále obsahoval: E.
coli (nepatogenní),
Serratia rubidea |
identifikace |
frekvence |
body |
procento |
Escherichia coli O157 |
115 |
2 |
100% |
Celkem |
115 |
|
100% |
Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 20 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.
Identifikace Escherichia coli O157 nečinila laboratořím žádné obtíže. Všechny laboratoře získaly plný počet bodů.
Vzorek 4: Izolát z krve od pacienta z JIP. |
Odpověď: Kluyvera ascorbata |
identifikace |
frekvence |
body |
procento |
Kluyvera ascorbata |
111 |
2 |
96,5% |
Kluyvera species |
4 |
1 |
3,5% |
Celkem |
115 |
|
100% |
Z 20 laboratoří s nejvyšším dosaženým počtem bodů za minulý rok uvedlo správný výsledek 19 laboratoří. Vzorek je možno hodnotit.
Požadavek byl identifikovat
druh zaslaného kmene a vyšetřit jeho citlivost k cefotaximu a ke
gentamicinu. Kmen 4 je Kluyvera ascorbata (NRL/ATB 5473/05), rezistentní
k cefotaximu (v důsledku inherentní produkce širokospektré b-laktamázy) a je citlivá ke
gentamicinu. Kluyvera ascorbata byla zaslána k identifikaci
v počátcích EHK, (EHK-19), kde kmen určilo správně pouze 55% laboratoří. K.
ascorbata je oportunním patogenem, který může být izolován
z relevantních klinických materiálů, (nejčastěji ze sputa, moči a krve). K.
ascorbata je možné od K. cryocrescens odlišit pozitivním
askorbátovým testem, neschopností růstu při
Všech 115 laboratoří
vyšetřilo citlivost správně. Celkové výsledky vyšetření citlivosti jsou
v tabulce 1, která obsahuje také limitní hodnoty průměrů inhibičních zón
(IZ) a minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny
gramnegativních tyčinek, hodnoty naměřené v NRL pro antibiotika a výsledky
laboratoří v kategorii citlivosti a rezistence u kmene 4.
Tabulka 1. Výsledky vyšetření citlivosti kmene 4 Kluyvera ascorbata
Antibiotikum |
Průměry IZ (mm) |
MIC (mg/l) |
Správné výsledky |
||||
limit pro citlivé G-T [2] |
rozmezí hodnot naměřených v NRL* |
limit pro citlivé G-T [2] |
hodnoty naměřené v NRL** |
katego-rie [2] |
počet laboratoří |
% |
|
cefotaxim |
>=18 |
10 - 12 |
<= 4 |
> 32 |
R |
115/115 |
100,0 |
gentamicin |
>=15 |
19 - 20 |
<= 4 |
<= 0,25 |
C |
115/115 |
100,0 |
*) 5 měření diskovou difuzní metodou; obsah disků:
cefotaxim 30 ug, gentamicin 10 ug;
**) 3 měření diluční mikrometodou;
C: citlivý, R: rezistentní.
Vzorek
5: Shigella sonnei |
U kmene 5 Shigella sonnei
(NRL/ATB 5036/05) byl
požadavek na vyšetření citlivosti k ampicilinu a chloramfenikolu. Všech
115 laboratoří správně označilo kmen 5 jako rezistentní k ampicilinu a
citlivý k chloramfenikolu. Celkové výsledky vyšetření citlivosti jsou
v tabulce 2, která obsahuje také limitní hodnoty průměrů inhibičních zón
(IZ) a minimálních inhibičních koncentrací (MIC) pro citlivé kmeny
gramnegativních tyček, hodnoty naměřené v NRL pro antibiotika a výsledky
laboratoří v kategorii citlivosti a rezistence u kmene 5.
Tabulka 2.
Výsledky vyšetření citlivosti u kmene 5 S. sonnei
Antibiotikum |
Průměry IZ (mm) |
MIC (mg/l) |
Správné výsledky |
||||
limit pro citlivé G-T [2] |
rozmezí hodnot naměřených v NRL* |
limit pro citlivé G-T [2] |
hodnoty naměřené v NRL** |
katego-rie [2] |
počet laboratoří |
% |
|
ampicilin |
>= 17 |
6 - 6 |
<= 8 |
> 64 |
R |
115/115 |
100,0 |
chloramfenikol |
>= 18 |
25 - 26 |
<= 8 |
1 - 2 |
C |
115/115 |
100,0 |
*) 5 měření diskovou difuzní metodou; obsah disků:
ampicilin 10 ug, chloramfenikol 30 ug;
**) 3 měření diluční mikrometodou;
C: citlivý, R: rezistentní.
KOMENTÁŘ
V sérii EHK-442 dosáhly
všechny laboratoře plný počet bodů vyšetření citlivosti. Pro informaci lze uvést, že Kluyvera ascorbata inherentně produkuje
enzym označovaný jako cefotaximáza-M, který je schopen velmi rychlého šíření,
zejména v komunitě. Cefotaximáza produkovaná K. ascorbata patří do početné skupiny cefotaximáz, enzymů
nepříbuzných s jinými širokospektrými b-laktamázami [3].
LITERATURA
[1] Farmer III JJ , Fanning GR, Huntley-Carter
GP, et al. Kluyvera, a new (redefined) genus in the family Enterobacteriaceae:
identification of Kluyvera ascorbata sp. nov. and Kluyvera
cryocrescens sp. nov. in clinical specimens. J Clin Microbiol 1981; 13(5): 919-933.
[2] Urbášková P. Rezistence bakterií k
antibiotikům. Vybrané metody. ISBN 80-238-3106-2. TRIOS Praha 1998.
[3] Bonnet R. Growing group of extended –spectrum
b -lactamases: the CTX-M enzymes. Antimicrob Agents Chemother 2004; 48: 1-14.
MUDr. Helena Žemličková
RNDr. Pavla Urbášková, CSc.
SZÚ– CEM