Zprávy CEM (SZÚ, Praha) 2006; 15(5): 208 – 209.

 

EHK - 468  Identifikace viru

 

Radomíra Limberková, Irena Matyášová

 

    Vzorky pro externí hodnocení  kvality, virovou identifikaci, připravily spolupracující Národní referenční laboratoře pro chřipku, pro nechřipkové respirační viry a pro enteroviry. Zúčastněné laboratoře obdržely zásilku pěti vzorků simulující klinické materiály doprovázené legendou zahrnující pohlaví a věk pacienta, klinickou diagnózu a druh klinického vzorku – nasopharyngeální výtěr nebo izolát ze stolice či moku.

 

    Série EHK – 468 se zúčastnilo 15 laboratoří,  kterým bylo zasláno 5 vzorků (3 vzorky enterovirů a 2 vzorky respiračních virů)  k určení virového agens klasickými metodami izolace virů a rychlými metodami průkazu virových antigenů podle možností jednotlivých pracovišť. Od všech pracovišť se v požadovaném termínu vrátily výsledkové protokoly k vyhodnocení. Dvě laboratoře neprovádějí vyšetřování enterovirových nákaz a zpracovaly tudíž pouze respirační vzorky.

 

Každý vzorek byl hodnocen v rozmezí 0-2 body

 

     Správný výsledek…………………. 2 body

     Částečně správný výsledek……….. 1 bod

     Nesprávný výsledek………………. 0 bodů

 

Maximální počet získaných bodů byl 10, respektive 4 ( pro laboratoře neprovádějící vyšetřování enterovirů).   

 

 

Vzorek 1 – nasopharyngeální výtěr = negativní

Správně určeno:                        14/15            93,33%

(jednou určeno jako influenza B)

 

Vzorek 2 – nasopharyngeální výtěr = influenza B

Správně určeno:                       15/15             100 %

 

Vzorek 3 – izolát ze stolice = negativní

Správně určeno:                       13/13             100 %

(dvě pracoviště neprovádějí vyšetření enterovirových nákaz)

 

Vzorek  4 – izolát z moku  = enterovirus

Správně určeno:                       13/13              100 %

(dvě pracoviště neprovádějí vyšetření enterovirových nákaz)

 

 

Vzorek  5 – izolát ze stolice = enterovirus

Správně určeno:                         13/13            100 %

(dvě pracoviště neprovádějí vyšetření enterovirových nákaz)

 

 

Hodnocení podle virového agens

 

 

Enteroviry – maximální počet bodů    6             13 laboratoří

                       2 laboratoře neprovádějí diagnostiku enterovirů 

 

Respirační viry – maximální počet bodů   4        14 laboratoří

                                                                     2          1 laboratoř

 

 

Celkové hodnocení

 

10  bodů                        získalo  12  laboratoří

  8 bodů                         získala    1 laboratoř

  4 body                         získaly    2 laboratoře (jen za respirační vzorky)

 

   Limitní počet získaných bodů pro úspěšné absolvování EHK-468 pro enteroviry byl 3,9 a pro respirační viry byl 2,6. Všechny laboratoře  dosáhly a překročily limity. Z toho 12 (respektive 14) laboratoří dosáhlo maximálního počtu bodů s omezením dvou z nich pouze na vyšetřování respiračních virů.

  

   V určování enterovirů nebyly zjištěny žádné potíže, ve všech 13 laboratořích, které vyšetřují enterovirové nákazy, se provádějí izolační pokusy na tkáňových kulturách a úspěšnost byla stoprocentní. Následná identifikace již probíhá v NRL pro enteroviry.  

 

   V bloku respiračních virů  nečinilo vyšetření vzorků problémy a kromě jedné  laboratoře všechna pracoviště získala plný počet bodů. Vyšetření byla prováděna  metodou ELISA i expresními metodami. Kultivaci respiračních virů běžně provádí 11 zúčastněných  laboratoří, u 8 z nich bylo dosaženo pozitivního výsledku, zbylé laboratoře nepracují s linií MDCK vnímavou pro viry influenzy, a proto se jim nepodařilo virus influenzy typu B  úspěšně pomnožit..

 

   Souhrnně lze říci, že série EHK-468 dopadla velice úspěšně pro všechny zúčastněné laboratoře. Níže uvedený přehled diagnostik používaných jednotlivými laboratořemi byl sestaven na základě informací, které na svých výsledkových protokolech uvedla jednotlivá pracoviště. Tento přehled je doplněn informací o rutinně používaných diagnosticích v referenčních laboratořích.

 

 

Přehled používaných metod pro diagnostiku enterovirů v zúčastněných laboratořích

 

  1. Tkáňové kultury: LEP (11x), MK2 (7x), VERO (2x), CV-1 (2x), L20B, RD-A, HeP2
  2. RT-PCR nested
  3. NIF DAKO anti-enterovirus
  4. Adenolex, Rotalex

 

 

 

Přehled používaných metod pro diagnostiku enterovirů v národní referenční laboratoři

 

NRL používá všechny výše zmíněné typy tkáňových kultur, protože provádí následnou identifikaci kmenů izolovaných terénními laboratořemi na tkáňových kulturách, na nichž byl enterovirus izolován.

 

Přehled používaných metod pro diagnostiku respiračních virů v zúčastněných laboratořích

 

      1.   Tkáňové kultury: LEP (9x), MK2 (7x), MDCK (7x), VERO, Hep-2,CV-1, HeLa

      2.   Kultivace v kuřecím embryu

      3.   Monofluokit infl.

      4.   ELISA Quadrogen, Virion

5.   PIF DAKO Imagen Influ virus A a B

  1. Adeno- Respistrip, RSV – Respistrip Coris
  2. Quick vue Infl.A+B, Quidel
  3. Quick S – Influ A B, Denka Seiken
  4. Binax Now Flu A,B Ag

( 10.  Eliset SZÚ chřipka A, B, AV, RSV, PIV – 1,3 )

 

 

 

Přehled metod používaných v národních referenčních laboratořích pro rutinní diagnostiku respiračních virů

 

1.     Tkáňové kultury: L 132, MK2, MDCK

2.     Kultivace v kuřecím embyu

3.     Eliset SZÚ chřipka A, B, AV, RSV, PIV – 1,3

 

pro konfirmaci:  Quick vue Influ A+B Denka Seiken, RSV-Respistrip, AV- Respistrip

 

 

MUDr. Radomíra Limberková

RNDr. Irena Matyášová, CSc.

SZÚ-CEM